教你正確操作小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒

　　以下是?小鼠免疫球蛋白A ELISA試劑盒?的規(guī)范操作指南：

　　TZXD-2055  小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用?雙抗體夾心法?：包被抗體捕獲樣本中的IgA后，加入HRP標(biāo)記檢測抗體形成復(fù)合物，TMB顯色(藍(lán)色→黃色)，450nm波長下OD值與IgA濃度正相關(guān)。

　　二、樣本處理?

　　血清?：室溫凝固10-20分鐘，2000-3000×g離心20分鐘取上清，避免溶血或反復(fù)凍融。

　　血漿?：EDTA/肝素抗凝，離心后取上清，避免使用含NaN3的試管。

　　組織勻漿?：PBS勻漿后離心，分裝保存于-20℃。

　　三、操作步驟?

　　加樣?：

　　空白孔不加樣，標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度標(biāo)準(zhǔn)品(如2700ng/L起始稀釋)，樣本孔加50μl待測液。

　　溫育?：37℃孵育30分鐘，洗滌3次(每次浸泡1分鐘)。

　　顯色?：

　　加TMB避光顯色15分鐘，終止液終止反應(yīng)。

　　檢測?：酶標(biāo)儀450nm讀值，標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。

　　四、注意事項(xiàng)?

　　試劑平衡?：使用前室溫平衡30分鐘，避免直接暴露光線。

　　防污染?：戴手套/口罩操作，移液器避免交叉污染。

　　保存?：未用板條密封保存于2-8℃，顯色劑B需避光。

　　五、技術(shù)參數(shù)?

　　檢測范圍?：1-32μg/mL(部分試劑盒靈敏度0.1μg/mL)。

　　重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%。

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