雞沙門氏菌抗體(Salmonella-Ab)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　一、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)，通過預(yù)包被沙門氏菌抗體的微孔板與樣本中的目標(biāo)抗體結(jié)合，再通過酶標(biāo)二抗顯色反應(yīng)，最終通過吸光度值定量檢測雞血清/血漿中的沙門氏菌抗體水平。

　　二、試劑盒組成

　　組分規(guī)格保存條件

　　預(yù)包被微孔板96T/48T2-8℃密封

　　標(biāo)準(zhǔn)品(含陰性/陽性對照)6瓶(0-8.1ppb梯度)2-8℃

　　酶標(biāo)二抗6ml2-8℃避光

　　TMB底物液A/B各6ml2-8℃避光

　　終止液(2M溶液)6ml室溫

　　濃縮洗滌液(20×)20ml2-8℃

　　三、樣本處理

　　血清/血漿：采集后室溫靜置2小時或4℃過夜，1000×g離心20分鐘，取上清-20℃保存(避免反復(fù)凍融)。

　　組織勻漿：按1:9比例加入PBS，冰上研磨后5000×g離心5分鐘取上清。

　　注意事項：溶血樣本需離心過濾后使用。

　　四、操作步驟

　　加樣

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0-8.1ppb) 。

　　樣本孔：先加40μL稀釋液，再加入10μL樣本(終稀釋度5倍)。

　　孵育：37℃避光孵育60分鐘，封板膜密封。

　　洗滌：棄液后每孔加滿洗滌液，靜置30秒，重復(fù)5次，拍干。

　　顯色：每孔加TMB底物A/B各50μL，37℃避光顯色15分鐘。

　　終止：每孔加50μL終止液，立即測定OD450值。

　　五、關(guān)鍵注意事項

　　移液精度：使用校準(zhǔn)后的移液槍(誤差<2%)，槍頭需“一頭一換。

　　溫度控制：試劑需提前30分鐘恢復(fù)室溫，避免水浴加熱。

　　避光操作：TMB底物全程避光，顯色時用錫紙覆蓋酶標(biāo)板。

　　安全防護(hù)：終止液含強(qiáng)酸，需戴手套操作。

　　六、結(jié)果分析

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)為橫坐標(biāo)，OD450值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　樣本濃度通過曲線方程計算，OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時需稀釋復(fù)測。

　　七、貯存與有效期

　　未開封試劑盒：2-8℃保存6個月。

　　開封后微孔板：密封干燥保存，避免受潮。